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pcr技术如何通过标本确诊疾病

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我们的实验要检测mRNA,因为时间问题,想先把模都造出来,不知道造好后低温保存(-70摄氏度)会不会影响结果。本人自觉低温下应该影响不大,关键是冻融的过程不好说,不知有否高手有这方面经验。
确切的说是以后把这些标本从冰箱里拿出来做检测,标本解冻的过程不放心。 , 甲醛固定标本1个多月了,还能作pcr吗? ...

pcr标本可以经过缓冲间带入制备室吗: 只要是能够获得有效DNA的样本都可以,如果样本中不含目的DNA或者DNA已经被彻底降解,就无法进行扩增。

PCR实验室污染的原因有哪些?: 污染原因:
1)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。
2) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3.)PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013 拷贝/ml),远远高于PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。
4)容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000 拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

用来做PCR的标本有什么要求?: 而mRNA冻融极容易降解,况且由于环境和未知的原因(大多数溶液和物体上都有RNAase),所以,也是容易降解的一个原因

建议反转录成cdna冻存,相对来说更稳定一些

PCR污染的原因是什么: 污染原因:
1)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。
2) PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
3.)PCR扩增产物污染:这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013 拷贝/ml),远远高于PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳就可形成假阳性。
4)容易忽视,最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染;在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶,在操作时比较剧烈地摇动反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000 拷贝,因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

甲醛固定标本1个多月了,还能作pcr吗?: 不太可能,RNA降解太快,而且取材特别讲究,动作要快,离体后要尽快放入液氮罐,后来可以转移到-80度冰箱,而且要尽快提取RNA,逆转录cDNA,然后放在-20度冰箱长期保存,上述步骤都要特别小心,很多东西都要进口枪头和DEPC水泡过,操作要特别小心

PCR实验室污染了怎么处理?: 出现污染后,我们首先考虑可能是试剂的污染,更换新批号的HBV试剂重新检测后,结果仍为全部标本阳性。
将HBV标本拿到其他正规的PCR实验室检测,结果标本中阴、阳性结果都有,阴性对照是阴性,阳性对照是阳性,说明标本没有被污染将两种批号的HBV试剂拿到其他正规的PCR实验室检测,也显示试剂没有问题。
我实验室用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将所使用微量进样器、离心管、枪头、手套、记号笔、记录本等都更换掉,再将HBV标本进行检测,结果全部标本仍然为阳性。
用消毒液擦拭工作台面后,打开所有的紫外灯照射一天,将HBV标本重新检测,同时设置了两个阴性对照(A和B),A 阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿,打开反应管的盖子,在空气中暴露10 min,盖上盖子,上机检测;B阴性对照为将试剂的反应管从试剂盒中拿,不开盖子,直接上机检测。结果是全部标本和A阴性对照为阳性,而B阴性对照为阴性。
至此,虽然还查找不到污染源是什么,但有一点可以肯定,PCR实验室污染是气溶胶扩散而引起的后来经过调查,发现污染是由于本室工一位工作人员在打扫实验室卫生时,用扩增区的扫笤和拖把打扫了标本制备区的卫生引起。

在确定了污染的原因后,我们就开始着手排除污染,每天都打开整个PCR 实验室的门窗和排气扇,让整个实验室通风,用消毒液擦拭整个PCR实验室,打开所有的紫外灯照射。
每隔3 d按3.5步骤检测一次,一直这样处理了一个月,A阴性对照才转为阴性。连续检测三次A和B阴性对照,每次结果都均为阴性,才确定PCR实验室恢复正常。

通常我们对PCR实验室污染的预防是采取隔离不同操作区、分装试剂、改进实验操作等规则,对污染的处理是用稀盐酸擦拭或浸泡;紫外线照射法等 ]。而对于实验室的通风方面没有给予足够的重视,为了防止实验区间之间的相互污染,各个实验区间都是尽可能的密闭,从而使得实验室出现PCR产物残留污染的几率增大。从本次PCR实验室污染排除的过程来看.我觉得污染得以排除的一个关键是通风。适当的给予实验室通风,可起到空气稀释的作用,有利于PCR产物残留量的减少,加快实验室污染的排除。

关于在PCR实验过程中遇到的问题。 在处理体液标本时,如何能较好地处理血性标本?: 可以使用红细胞裂解液,特异的把红细胞裂解掉,不会裂解有核细胞,然后再离心收集其他细胞,提取RNA、DNA或蛋白质做下一步分析研究。
生物公司有卖这种产品的。

qrt-pcr外周血标本的用什么抗凝剂: 左转生物吧

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